實驗原理
免疫共沉澱(Co-Immunoprecipitation)是利用抗原與抗體之間的專一性作用為基礎，從而用於研究蛋白質與蛋白質之間相互作用的一種方法。抗體與裂解液中相應的蛋白結合後，再與ProteinA/G偶聯的Sepharose或MagneticBeads孵育，通過離心或者借助磁力架獲得ProteinA/G磁珠-抗體-目的蛋白複合物，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白，再通過Western Blot或質譜（MS）鑒定蛋白質。其原理圖如下：
實驗流程
試劑盒組分
常見問題
Q1：通過CoIP後WB驗證發現，沒有想要的目的條帶？
A：多方麵原因造成:
1）有可能是樣品被蛋白酶降解，對應的策略是需要添加蛋白酶抑製劑，所有操作保持4℃以下冰上操作並且避免反複凍融。
2）有可能是抗體濃度太低導致條帶較淺，則需要調整IP或WB抗體濃度，必要時設立濃度梯度，摸索最佳濃度。
3）抗體親和力太低，選用適合於IP或者WB的抗體。
4）有的IP抗體未與磁珠結合，這種情況需選用適合IP的磁珠。
5）若Tag未暴露在融合蛋白構象的表明，則需改變Tag融合表達部位。
6）裂解液鹽堿度太高，需用低鹽堿度的裂解液。
7）抗體選擇不當，更換抗體。
Q2：通過CoIP後WB驗證發現，雖然可見目的條帶，但是背景很高：
A：多方麵原因造成:
1）由非特異帶白結合導致背景高，若要避色主特異性帶白結合，則需要在無血清溶液中裂解細胞，且在免疫沉澱前用protein(A/G)磁珠預洗免疫沉澱後增加漂洗次數和鹽堿度(高鹽或去垢劑)。
2）實驗儀器或試劑被汙染，使用潔淨的儀器及實際。
3）轉移膜上的目特異吸附導致背景高，實驗操作過程中載手套，使用鑷子來取，不要接觸膜轉移麵。
4）製備樣品中可能有不完全溶釋的大的蛋白複合體，則在製備樣品後進行知暫超聲處理(3次，每次5秒鍾 )，然後離心，取上清後進行後續試驗。
5）洗滌不徹底，則需要多次洗滌，並設新增加洗滌液中的NaCl和去垢劑濃度。
6）可能有非特異性蛋白吸附於珠子上，則須進行Preclearing以排非特異性吸付。
7）抗體本身待異性不好可能導數者景高，則須選擇合適的抗體，可以考慮單抗。
8）使用了過多的細胞或組織進行裂解導致背景高，則須減少樣本量，推薦100-500ug細胞裂解物。
9）蛋白降解也可能出現高背景的情況，盡量使用新鮮製備的樣品。
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