產品說明
M-MLV Reverse Transcriptase是經基因工程改造的反轉錄酶，降低了RNase H活性，提高了熱穩定性，可以比野生型的M-MLV在更高的溫度下合成第一鏈cDNA。本產品在50-60°C均有正常活性，具有更高的特異性、更高的產量且可以合成長達12 kb的cDNA。
產品介紹
MMLV逆轉錄酶是由Moloney鼠白血病病毒來源的M-MLV基因經突變篩選，並通過大腸杆菌表達獲得的反轉錄酶。該酶具有更高的溫度耐受性，適用於高溫反轉錄，有利於消除RNA高級結構與非特異性因素對cDNA合成的不利影響，具有更高的穩定性和反轉錄合成能力。
產品特點
耐高溫：可在50-60℃高溫條件下進行逆轉錄，並且反應保持穩定；
反轉錄效率高：針對低濃度RNA模板，保證合成效率和成功率；
產品應用
第一鏈 cDNA 合成，用於 RT-PCR 和RT-qPCR
合成 cDNA，用於克隆和表達研究
產品數據
1、與同類產品SDS-PAGE電泳檢測對比
Line 1、2、3：CSB-DEM025 M-MLV逆轉錄酶
Line 4：某品牌M-MLV 逆轉錄酶
圖1. CSB-DEM025 M-MLV逆轉錄酶與同類產品SDS-PAGE電泳檢測
2、與競品酶對比測試
圖2. CSB-DEM025 M-MLV Reverse Transcriptase與同類產品的逆轉錄溫度測試
3、加速熱穩定性
圖3. CSB-DEM025 M-MLV Reverse Transcriptase 37℃加速熱穩定性
產品組分
產品參數
操作說明
第一鏈cDNA合成 (簡易流程)
按下表添加並混合各組分，55°C孵育0.5H。如果使用隨機引物，建議在55°C反應前先將反應體係置於25°C反應5 min。
注：1 ng-1 µg 總RNA模板或50 pg-100 ng Poly(A)-RNA。在95℃ 3min使酶失活。對於下遊PCR應用，逆轉錄產物的加入體積不應超過PCR反應總體積的1/10。
第一鏈cDNA合成 (標準流程)
如果需要變性模板RNA，請使用以下方案。
在無RNase的PCR管中加入RNA模板和d(T)23VN引物。
*注：1 ng-1 µg 總RNA模板或50 pg-100 ng Poly(A)-RNA。
將以上體係置於65°C下反應5min，使RNA模板/引物變性後短暫離心並迅速置於冰上2min。
然後向上述PCR管中加入以下組分：
混勻後，55°C孵育0.5H。如果使用隨機引物，建議在55°C反應前先將反應體係置於25°C反應5 min。
95°C加熱3 min使酶失活，逆轉錄產物儲存在-20°C。對於下遊PCR應用，逆轉錄產物的加入體積不應超過PCR反應總體積的1/10。
一步法RT-qPCR反應
推薦使用本公司優化的One Step RT-qPCR KIT進行測試。一般情況下一個反應推薦M-MLV Reverse Transcriptase濃度為0.5-2U/μL，擴增條件如下：
