服務介紹
噬菌體展示技術通過將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示於噬菌體表麵，進行高通量篩選及富集，並對所需功能的克隆進行定性分析，該技術展示對象涵蓋抗體、抗體 片段、肽段、cDNA等。在對抗體庫的研究中，噬菌體展示技術可對人和其他動物的B細胞抗體庫進行體外建庫篩選，避開了免疫和細胞融合等步驟從而縮短實驗周期並增加了穩定性，該技術還具有篩選容量大、可發酵大量主產、方法簡單等優點。
服務優勢
- 固相和液相噬菌體展示文庫篩選經驗豐富，可自動化進行噬菌體展示高通量篩選，實現快速交付；
- 天然抗體文庫庫容可高達10^10及以上，免疫抗體文庫庫容可達至少10^7及以上；
- 引入先進的親和力檢測技術，深入的生物信息學分析，選擇最佳的人源框架區序列快速且高通量篩選高親和力及高產量的人源化抗體；
- 片段插入率高。
最終交付
- 建庫交付：
- 測序報告；
- 建庫過程的檢測數據（抗體基因擴增，庫插入效率檢測，庫多樣性檢測，其標準為：抗體基因插入比例 ：90%以上；庫容：10^8；有效抗體基因比例：70-80%；插入長度一般是750bp左右 ， 因為每個抗體的CDR區長度不同，所以插入長度的指標一般不做具體要求）；
- TG1抗體庫（或者噬菌體展示抗體庫 ）20-30ml，按照1ml/管 進行分裝。
- 篩選交付：
- 經過3-4輪篩選，挑取單克隆進行ELISA p檢測，以高於空白及陰性對照2.2倍為陽性克隆的判斷標準，交付至少5個克隆測序結果。
服務說明
| 序號 | 庫類別 | 種屬 | 天然庫還是免疫庫 | 抗體基因來源 | 標簽 | 庫容 | 周期 |
| 1 | ScFv | 人 | 天然庫 | 外周血 | E-tag/His-tag/HA | ≥9次方 | 8-10周 |
| 2 | 鼠 | ||||||
| 3 | 兔 | ||||||
| 4 | scfv | 人 | 免疫庫 | 外周血/脾髒 | ≥7次方 | 18-24周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 4 | Fab | 人 | 天然庫 | 外周血 | ≥9次方 | 8-10周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 4 | Fab | 人 | 免疫庫 | 外周血/脾髒 | ≥7次方 | 18-24周 | |
| 5 | 鼠 | ||||||
| 6 | 兔 | ||||||
| 7 | sdAb | 羊駝 | 天然庫 | 外周血 | ≥9次方 | 8-10周 | |
| 8 | 免疫庫 | 18-24周 | |||||
| 9 | 半合成庫 | 8-12周 | |||||
| 10 | 7肽 隨機庫 | \ | 隨機肽庫 | \ | ≥9次方 | \ | |
| 11 | 12肽 隨機庫 | \ | 隨機肽庫 | \ | ≥9次方 | \ |
案例展示
常見問題與解析 (Q&A)
1）TG1宿主菌：用於被噬菌體感染後擴增（特征：抗體序列和噬菌體的P3蛋白通過TAG偶聯，TG1菌的特點是對TAG既可以識別為終止子，即隻表達出抗體，分泌上清中，也可識別為TAG編碼的aa，翻譯成Q（穀氨酰胺），此時抗體序列即和噬菌體P3相連，展示在噬菌體表麵，所以此時上清是一個混合物，通常用於篩選）； 2）抗體庫：有兩種形式，一是TG1菌（內含展示抗體的phagemid），下一步如果要做篩選需添加輔助噬菌體，使phagemid包裝到噬菌體上，使之成為含有抗體序列的噬菌體庫，用於篩選；二是已包裝完成的噬菌體庫（含有展示抗體的phagemid），下一步做篩選，其實二就是已經做完一的步驟； 3）輔助噬菌體：構建好的小鼠天然抗體庫通常以噬菌粒的形式保存在宿主菌中，在淘選過程開始前，應當先拯救文庫，使其成為噬菌體展示的抗體庫輔助噬菌體，過程即添加輔助噬菌體，起作用是編碼產生另一些噬菌體所不能產生的重要蛋白質，使另一些噬菌體得以生長和繁殖； 4）HB2151表達菌（特征：對ATG隻能識別為終止子，是抗體單獨分泌到上清中，主要用於表達！） 備注：TG1和HB2151的差別是，TG1是終止密碼抑製菌株，終止密碼可以通讀，HB2151就不行了，也就是說TG1可以表達scfv抗體-P3蛋白，而HB2151可以隻表達出scfv抗體。
對於噬菌體抗體庫做篩選的話： 1.優勢：抗體庫技術不僅可以模擬動物免疫係統產生抗體的過程，還具有許多獨特的優點，令雜交瘤技術難以相比。抗體庫技術無需免疫，從理論上講，108-1010的庫容就可能包容所有的抗體。利用抗原即可直接從非免疫動物抗體庫中篩選出特異性抗體，然後將陽性克隆重組到質粒表達載體，通過大腸杆菌或者真核細胞直接表達有功能的抗體分子，周期較短，通常16-20周即可完成一個天然抗體庫的構建及篩選工作； 2.劣勢：scfv抗體親和力相對傳統雜交瘤技術獲取的全抗體偏低或者相當，但如果不影響內源樣本或者二三級結構的識別，該劣勢點即可彌補！ 傳統雜交瘤技術做篩選的話： 1.優勢：通過多次免疫使動物體內產生的抗體達到親和力成熟後，取動物的B淋巴細胞進行融合，經過多次亞克隆篩選獲得可穩定分泌特異性抗體的雜交瘤細胞株，並能持續培養獲得抗體，該種方法獲得的抗體相對噬菌體抗體庫篩選的單鏈抗體來說屬於天然全抗體，抗體親和力更高，可應用的實驗類型也更為廣泛，其次批間差較小； 2.劣勢：周期較長，一般從抗原製備開始到獲得單鏈抗體，需要至少5個月的時間。
我們合作的噬菌體庫篩選項目一般是這麼個流程，客戶拿到上清，會初步做下結合活性和部分功能驗證，可用的測序拿到序列，然後批量構建，批量表達，篩選出高表達高親和力的，再進一步測試是否有比如成藥靶點潛力等實驗。我們表達了這麼多抗體項目經驗來看，還是要用哺乳係統。因為大腸係統很難實現上清表達，大多是包涵體，而抗體要想有功能，必須還是上清表達，借助哺乳係統，加上可分泌到上清中的信號肽，而抗體效價跟抗體純度跟濃度肯定是分不開的
噬菌體的滴度很高，從之前的陽性測試就能看得出來，即便再稀釋個10倍甚至100倍，都還會有2.0的讀值，有少量非特異性吸附是很正常的，不然淘選階段都結合上的噬菌體為什麼ELISA篩選後，隻有少量的克隆才能被挑選出來，測試交叉這種，是需要在合適濃度的抗原抗體反應體係下進行的，尤其是間接ELISA，不管是抗原還是抗體，濃度過高，少量的非特異性結合更常見。
相關資源
1、噬菌體展示技術的步驟
噬菌體展示技術的步驟主要包括以下幾個階段：
①構建噬菌體展示文庫：
● 獲取目標蛋白或多肽的編碼序列。
● 選擇適合的噬菌體展示係統，常用的包括M13噬菌體、T4噬菌體等。
● 將目標序列與噬菌體基因組中的外被蛋白基因（coat protein gene）連接，構建融合基因。
● 將融合基因插入噬菌體基因組中，構建噬菌體展示文庫。
②噬菌體展示：
● 將構建好的噬菌體展示文庫感染到宿主細菌中，如大腸杆菌。
● 細菌表達噬菌體展示文庫中的融合基因，使噬菌體顆粒表達在細菌表麵。
● 通過細菌培養和噬菌體產出，獲得大量的噬菌體顆粒。
③篩選和選擇：
● 準備目標分子，如蛋白質、抗體、小分子化合物等。
● 將噬菌體展示文庫中的噬菌體與目標分子進行特異性結合，一般采用固相吸附、免疫篩選等方法。
● 對結合複合物進行洗滌，以去除非特異性結合的噬菌體。
● 通過洗脫或者其他方法，獲得與目標分子結合能力較強的噬菌體。
④鑒定和分析：
● 從篩選出的噬菌體中提取基因，一般采用PCR擴增的方法。
● 對提取的基因進行測序，獲取融合基因的序列信息。
● 分析測序數據，確定與目標分子結合的蛋白或多肽序列。
以上是噬菌體展示技術的基本步驟。在具體應用中，可以根據需要進行優化和改進，例如引入多肽標簽用於檢測和純化、引入多重篩選步驟以提高篩選效果等。噬菌體展示技術的關鍵是構建高質量的展示文庫和有效的篩選方法，以獲得具有特定功能和結合性質的目標分子。
2、噬菌體展示技術的應用
噬菌體展示技術在生物醫學研究、生物製藥和生物技術領域有廣泛的應用。以下是一些噬菌體展示技術的主要應用領域：
● 抗體工程：噬菌體展示技術可用於抗體工程，用於篩選和優化具有高親和力和特異性的抗體。通過構建噬菌體庫，可以在大規模的抗體變異體中篩選出與特定抗原結合能力強的抗體。
● 肽和蛋白質工程：噬菌體展示技術可以用於篩選和改進具有特定功能的肽和蛋白質。通過展示肽或蛋白質變體庫，可以選擇具有特定性質的分子，如酶活性、結合活性、藥物親和性等。
● 藥物發現和開發：噬菌體展示技術可用於藥物發現和開發。通過在噬菌體上展示小分子化合物庫，可以篩選出與特定靶點結合的潛在藥物候選物。
● 蛋白質相互作用研究：噬菌體展示技術可用於研究蛋白質之間的相互作用。通過將兩個蛋白質或多肽的編碼序列連接到噬菌體基因組中，可以在噬菌體顆粒表麵同時展示這兩個蛋白質或多肽，並研究它們之間的結合性質和相互作用機製。
● 疫苗設計：噬菌體展示技術可用於疫苗設計。通過展示病原體的抗原蛋白質或多肽片段，可以誘導免疫反應，產生特定的抗體和免疫應答，從而用於疫苗的開發和疾病預防。
● 診斷工具和生物傳感器：噬菌體展示技術可用於開發診斷工具和生物傳感器。通過展示特定的診斷標誌物或靶分子，可以用於檢測和監測疾病標誌物、細菌、病毒等。
3、噬菌體展示技術中涉及到的一些專屬名詞及釋義
● 噬菌體（Phage）：一種寄生於細菌的病毒，可以利用其基因組中的外被蛋白基因來展示目標蛋白或多肽。
● 噬菌體展示（Phage Display）：將目標蛋白或多肽的編碼序列與噬菌體基因組中的外被蛋白基因連接，並通過噬菌體顆粒表麵展示目標分子的技術。
● 外被蛋白基因（Coat Protein Gene）：噬菌體基因組中編碼構成噬菌體顆粒外被蛋白的基因。
● 噬菌體展示文庫（Phage Display Library）：包含大量噬菌體顆粒的集合體，每個顆粒表麵展示著不同的蛋白或多肽變體。
● 多肽標簽（Peptide Tag）：在目標蛋白或多肽的編碼序列中引入的短小肽段，用於檢測、純化或定位目標蛋白或多肽。
● 固相吸附（Solid-phase adsorption）：一種常用的篩選方法，通過將固相材料（如酶聯免疫吸附板）與目標分子結合，使噬菌體與目標分子特異性結合。
