噬菌體展示產品
噬菌體展示技術通過將外源肽段和噬菌體衣殼蛋白融合展示於噬菌體表麵,進行高通量篩選及富集,並對所需功能的克隆進行定性分析,該技術展示對象涵蓋抗體、抗體片段、肽段、cDNA等。在對抗體庫的研究中,噬菌體展示技術可對人和其他動物的B細胞抗體庫進行體外建庫篩選,避開了免疫和細胞融合等步驟從而縮短實驗周期並增加了穩定性,該技術還具有篩選容量大、可發酵大量生產、方法簡單等優點。
購買NEB 的 3 種隨機肽庫包括 7 肽庫(Ph.D.-7)、12 肽庫(Ph.D.-12)和含有二硫鍵的環 7 肽庫(Ph.D.-C7C)。所有肽庫的容量超過 20 億個克隆。上述 3 種肽庫表達的隨機肽均在噬菌體次要包膜蛋白 pIII 的 N 端,故每一個病毒粒子可以表達 5 個拷貝。
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靶向肽藥物治療:
癌細胞進行隨機肽庫篩選,得到高親和力的小肽,應用於藥物轉載靶向運輸,減少機體副作用。
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模擬表位篩選:
抗體進行隨機肽庫篩選,得到的多肽,可以推斷出抗體可能識別的抗原表位。可用於未知病毒及疾病的靶蛋白序列推測。
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重金屬回收:
噬菌體多肽庫篩選出可以和金屬結合的肽段,用於重金屬的回收利用及重金屬汙染水質土壤的處理。
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篩選蛋白激動劑和抑製劑:
噬菌體肽庫篩選出與某蛋白特異性結合的多肽,通過相關實驗驗證其激活或者抑製活性的作用。
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化學新型材料研發:
通過噬菌體隨機肽庫篩選與金屬化合物結合的肽作為新型的粘合劑,以用於發現和產生新的複合材料。
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細胞表麵配受體篩選:
細胞表麵蛋白多為跨膜蛋白,膜蛋白難以表達,或者表達的蛋白難以保持正確的構象。用重組蛋白篩選的抗體,可能不識別細胞表達的抗原。可以用細胞直接從抗體庫中篩選出膜蛋白的抗體。
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藥用阻斷劑:
病原體通過與某一個受體蛋白結合後進入體內,通過篩選與受體蛋白結合位點相似的表位,在病原體入侵之前進行預防,阻斷病原體與受體蛋白的結合。
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中和解毒劑:
常規致毒動物的血清可進行毒液治療,但是產量及治療效果有限。通過噬菌體納米抗體庫篩選出與血清功能類似的中和抗體,利用其組織穿透力和低免疫原性,可提供更好的治療效果。
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雙特異性抗體:
通過噬菌體納米抗體庫,利用其分子量小,穿透力強的特性,篩選出即可以靶向目的細胞,也可以裝載藥物的納米抗體,用於靶向藥物治療。
序號 | 庫類別 | 種屬 | 天然庫還是免疫庫 | 抗體基因來源 | 標簽(可選) | 庫容 | 周期 | 交付標準 |
1 | ScFv | 人、鼠、兔 | 天然庫 | 外周血 | E-tag/His -tag/HA | ≧9次方 | 8-10周 | ①測序報告;②建庫過程的檢測數據(抗體基因擴增,庫插入效率檢測,庫多樣性檢測,其標準為:抗體基因插入比例:90%以上;庫容:10^8;有效抗體基因比例:70-80%;插入長度一般是750bp左右,因為每個抗體的CDR區長度不同,所以插入長度的指標一般不做具體要求);③ TG1抗體庫(或者噬菌體展示抗體庫) 2030 ml,按照 1ml/管進行分裝; |
2 | ScFv | 人、鼠、兔 | 免疫庫 | 外周血/脾髒 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
3 | Fab | 人、鼠、兔 | 天然庫 | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
4 | Fab | 人、鼠、兔 | 免疫庫 | 外周血/脾髒 | ≧7次方 | 18-24周 | ||
5 | sdAb | 羊駝 | 天然庫 | 外周血 | ≧9次方 | 8-10周 | ||
6 | sdAb | 羊駝 | 免疫庫 | 外周血 | ≧9次方 | 18-24周 | ||
7 | sdAb | 羊駝 | 半合成庫 | 外周血 | ≧9次方 | 8-12周 | ||
8 | 個性化庫構建 | 根據客戶需求 | 根據客戶需求 | 根據客戶需求 | 根據客戶需求 | 根據客戶需求 | 具體評估 |
篩選原類型 | 篩選原標準 | 備注 | 交付標準 |
單一組分的:重組蛋白、純 化 的 天 然 蛋 白、肽段 | 純度90%及以上 | 若需要驗證其他實驗,比如 WB 或 FACS 等,價格另議 | 經過3-4輪篩選,挑取單克隆進行ELISAp檢測,以高於空 白及陰性對照2.2倍為陽性克 隆的判斷標準,交付至少5個克隆測序結果 |
混合組分的,比如血清純化的抗體 、 組織、細菌、病毒、細胞等 | 組織裂解液蛋白抽提之後,總蛋白含量不低於5mg/ml | 經過3-4輪篩選,挑取單克隆進行ELISA檢測,以高於空 白及陰性對照2.2倍為陽性克隆的判斷標準,交付至少5個克隆測序結果 |
來源於人CD63(哺乳表達係統)重組蛋白,篩選人源化的VHH噬菌體抗體庫,獲得13條不同的抗體序列,選取其中8個抗體序列,采用哺乳係統進行VHH-FC抗體的重組表達量較高,重組抗體對篩選源進行ELISA檢測,效價結果與篩選結果相差不大。
編號 | 1F8 | 1G4 | 2A6 | 2H4 | 3B7 | 4F16 | 4H10 | 4A6 |
抗體原液 | 3.1056 | 2.921 | 2.7578 | 2.9423 | 2.575 | 2.7465 | 3.0024 | 2.6425 |
0.111111111 | 2.8245 | 2.5632 | 2.1875 | 2.3023 | 2.3273 | 2.5459 | 2.9412 | 2.1218 |
0.736111111 | 2.421 | 2.1421 | 1.5251 | 1.7012 | 1.7587 | 1.8424 | 2.4102 | 1.6548 |
3.513888889 | 1.652 | 1.3215 | 0.9213 | 1.0214 | 1.2324 | 1.1251 | 1.6248 | 0.8149 |
1:10000 | 0.7212 | 0.5621 | 0.5002 | 0.612 | 0.4521 | 0.5101 | 0.8426 | 0.4258 |
FC空載體表達對照 | 0.031 | 0.1023 | 0.2154 | 0.1389 | 0.1027 | 0.0124 | 0.1124 | 0.0296 |
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